Metoda 1: Metoda ekstrakcije (Metoda koja se trenutno koristi u mojoj zemlji; daje nižu čistoću, ali nudi niže troškove proizvodnje.)
Ekstrakcija otopine oksitocina: Uzmite 100 g osušenog praha stražnjeg režnja hipofize i 30 g kvarcnog praha, stavite ih u kuglični mlin i dodajte destiliranu vodu. Izvedite ekstrakciju četiri puta istim postupkom. Volumeni destilirane vode dodani za svaki korak su sljedeći: 1,4 L za prve dvije ekstrakcije i 1,3 L za naredne dvije. Svaka ekstrakcija se provodi 45 minuta, nakon čega slijedi centrifugiranje da se prikupi tekućina; preostali ostatak se zatim podvrgava daljnjoj ekstrakciji. Četiri dobivena ekstrakta se kombiniraju kako bi se dobila otopina oksitocina. Ukratko: Osušeni prašak stražnje hipofize [voda, kuglični mlin] → Ekstrakt oksitocina → Kromatografsko odvajanje.
Uzmite 1500 g prethodno-tretiranog sintetičkog zeolita, dodajte 20 L 0,25% otopine octene kiseline i-nakon miješanja-izlijte smjesu u-kolonu za ionsku izmjenu. Nakon što razina otopine octene kiseline padne na točku 2-3 cm iznad površine sloja zeolita, odmah unesite ekstrakt oksitocina. Održavajte odgovarajuću brzinu protoka i sakupite dobiveni bijeli, mutni eluat (ova frakcija prvenstveno sadrži oksitocin; budući da oksitocin ima izoelektričnu točku [pI] od 7,7-dok vazopresin ima pI od 10,9-vazopresin lako stvara pozitivne ione i stoga se adsorbira na stupac). Čim razina tekućine ekstrakta padne na površinu sloja zeolita, odmah dodajte destiliranu vodu i nastavite skupljati zamućeni eluat dok ne prestane istjecanje. Podesite pH sakupljenog zamućenog eluata na 3,5 pomoću ledene octene kiseline. Brzo zagrijte otopinu u vodenoj kupelji na 95 stupnjeva, održavajte tu temperaturu 3 minute, zatim brzo ohladite otopinu i stavite je u hladnjak preko noći. Ukratko: Ekstrakt oksitocina [HAc, kolona sintetskog zeolita] → Mutni eluat [HAc, zagrijavanje] → Odvojena otopina → Adsorpcija i eluacija. Sljedećeg dana filtrirajte ohlađenu otopinu. Filtratu dodajte 10% bentonitnu suspenziju uz miješanje (dodavajući 3 mL suspenzije na 100 mL filtrata). Nastavite miješati 1 sat kako biste olakšali adsorpciju, zatim centrifugirajte smjesu. Ispitajte tekućinu supernatanta pomoću otopine reagensa sulfosalicilne kiseline; odsutnost bilo kakvog taloga znači da je proces adsorpcije završen. Ako je adsorpcija nepotpuna, ponovite postupak obrade bentonita; zatim pomiješajte precipitate bentonita dobivene iz oba koraka adsorpcije. Bentonit se eluira četiri puta s 1% octenom kiselinom (s volumenima od 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L, odnosno 0,8 L). Za svaki eluat, *tert*-butiltriklorid se dodaje kada se otopina zagrije na 80 stupnjeva; temperatura se zatim podigne na 95 stupnjeva, brzo ohladi na 25 stupnjeva i filtrira ili centrifugira. Četiri dobivena filtrata se kombiniraju kako bi se odredila snaga i granica vazopresina. Tijek procesa je sljedeći: Ohlađena otopina [filtracija] → filtrat [bentonitna kaša] → adsorbat [1% HAc] → eluat. Priprema injekcije oksitocina:
Ispitana otopina oksitocina, koja zadovoljava standarde kvalitete, razrijedi se do koncentracije od 5 U/mL ili 10 U/mL. Zatim se filtrira kroz lijevak od sinteriranog stakla No. 4 ili No. 5, puni u ampule i sterilizira uz pomoć strujne pare na 100 stupnjeva 30 minuta kako bi se dobio konačni proizvod. Tijek procesa je sljedeći: Otopina oksitocina (test odobren) [filtracija, punjenje, sterilizacija] → injekcija oksitocina.
Regeneracija sintetičkog zeolita: Sintetski zeolit se dva puta ispere destiliranom vodom. Zatim se doda 1,5 L vode (računato na 500 g zeolita) i 150 g natrijevog klorida, te se smjesa miješa 2 sata da se ispere i ukloni vazopresin. Zeolit se zatim ispire destiliranom vodom dok ne prestanu kloridni ioni. Dodana je odgovarajuća količina vode i pH je podešen na 9 upotrebom natrijevog hidroksida; smjesa se miješa 30 minuta, nakon čega se supernatant dekantira. Zeolit se ispere destiliranom vodom, pH se namjesti na 5,5-6 pomoću sumporne kiseline, te se ponovno ispere vodom dok ne postane gotovo neutralan. Zatim se filtrira kako bi se uklonio višak vode i suši na 105 stupnjeva za buduću upotrebu. Prije upotrebe dodaje se odgovarajuća količina vode, a pH se podešava ledenom octenom kiselinom uz miješanje kako bi se omogućilo natapanje. Priprema 10%-tne suspenzije bentonita: Bentonit i voda se miješaju u omjeru mase-prema-volumenu od 1:10. Smjesa se melje približno 1 sat, za koje vrijeme se dodaje octena kiselina da se održi stabilan pH od 3,5. Dobivena kaša se zatim čuva u hladnjaku za buduću upotrebu. Metoda 2: Kemijska sinteza. Prvo se sintetizira heptapeptidni amid (segmenti 3-9) počevši od benziloksikarbonil-leucin *p*-nitrofenil estera; zatim se sintetizira benziloksikarbonil-S-benzilcistein-tirozin azid (segmenti 1-2); a u trećem koraku se sintetizira oksitocin.